Método del Numero Mas probable asociado a Escherichia Coli
NMP
Pruebas Presuntivas
Es una prueba que permite la presencia de coliformes totales y fecales sin diferenciacion. Se utiliza como medio de cultivo Caldo lauril sulfato triptosa ( CLST), el cual es capaz de inhibir notablemente el crecimiento de la flora microbiana acompañante indeseable ( gram+ , entre otras) y a su vez debido a su alta calidad nutritiva y a la cantidad de fosfatos que posee, garantizan un crecimiento rápido y la intensa formacion de gas incluso en el caso de coliformes que detectan la lactosa. La formacion de gas se detecta con campanas de fermentacion ( campanas durham).
Composición del caldo: Triptosa, lactosa, cloruro sódico, lauryl sulfato, sal sódica, hidrogenofosfato dipotásico, dihidrógenofosfato potásico.
Las pruebas presuntivas para coliformes no sirven para identificar de forma absoluta estos microorganismos. Las pruebas presuntivas positivas, pueden confundirse con otras en el caso que se consideren válidas.
Pruebas confirmativas de ccoliformes totales
Permite confirmar si realmente existen coliformes totales y fecales en la muestra. Todavía no existe diferenciacion entre los coliformes presentes, Para eso se inoculan tubos de Caldo verde bilis brillante (CVBB) a partir de los tubos que salieron positivos del ensayo anterior ( tubos que presentan gas). la bilis presente en este caldo nutritivo, tiene la finalidad de impedir el crecimiento de bacterias gram positivas.
Composicion: peptona, bilis de buey, lactosa, verde brillante.
El NMP se calcula con el número de tubos que dan resultado positivo en CVBB
Pruebas de confirmacion para coliformes fecales
Este ensayo tiene como finalidad reducir los margenes de determinacion sólo al grupo de los coliformes fecales, una vez que se ha obtenido el numero mas probable.
De cada cultivo de CSLT, se hacen 3 inocilaciones a otro tubo de media EC que a continuacion se incuban.
El aagar EC permite la inhibicion del crecimiento de bacterias gram positivas y otras que generen interferencia en los coliformes fecales.
Composicion: peptona de caseina, lactosa, mezcla de sales biliares, cloruro sodico, hidrogeno dipotasico, dihidrogeno fosfato potásico.
Ensayo confirmativo de Escherichia coli
Una vez obtenidos los resultados positivos del ensayo confirmativo de coliformes fecales, se extrae un inóculo y se traslada a una placa de agar LEAM (levine eosina azul de metileno) sembrando por agotamiento para obtener colonias aisladas. Este agar permite la inhibicion de bacterias gram + a traves de la accion de colorantes incluidos en su formula.
Composicion: peptona, lactosa, hidrogeno fosfato dipotasico, eosona amarillenta azul de metileno, agar- agar
Se obtiene el siguiente resultado si la presencia de Escherichia coli es positiva: colonias de 2 a 3 mm de diámetro, con brillo metálico verdoso reflejado a la luz, con centro oscuro hasta negro en luz transmitida.
